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但梅鶴孫卻說劉師培是突然離家出走，他在《劉氏五世小記》中記載：“這一天，舅氏忽然出外未歸，舉家皇急，派人四出尋覓。有人說看見他乘紅船過江的。後來接到上海來信，其實當時是林少泉與他一同赴滬的。”
在上海，劉師培結識了章太炎、蔡元培、章士釗、陳獨秀等人，在他們的影響下，劉師培迅速轉變成一個反清鬥士，從此絕意科場，投身民主革命活動。他反對滿漢一體的論調，主張排滿，在《蘇報》發表《留別揚州人士書》、《中國民約精義》等文章，公開表明自己的革命立場。
劉師培投身革命後，更名為劉光漢，“光漢”為“光復漢族”之意，表示其反清排滿之決心。
劉師培在《留別揚州人士書》中，呼籲創辦新式學堂、鼓勵出洋留學；在《論留學生之非叛逆》，公開表示支援學生運動。
1903年，俄國侵略東北，蔡元培等人發起“對俄同志會”，並創辦《俄事警聞》，劉師培加入該會，並擔任《俄事警聞》主筆之一。後1904年初，《俄事警聞》改名《警鐘日報》，劉擔任主編。
劉師培祖輩三代治《左傳》，是不折不扣的舊式文人，但劉師培投身革命後，成為《中國白話報》的主要撰稿人，以白話文撰寫文章宣傳民主革命。
劉師培曾在《中國白話報》發表《論激烈的好處》一文，文字激昂，革命情緒高漲，並署名“激烈第一人”。劉師培在文中說，惟有激烈的手段可以喚醒和鼓動中國的民眾，使他們不再安於現狀，苟且偷生。一言以蔽之，中國的衰亡都誤在“平和”二字，要治本就得激烈。
劉師培曾先後參加了蔡元培組織的軍國民教育會、暗殺團，是光復會的首批會員，加入同盟會、國學儲存會等組織。加入暗殺團時，先“設黃帝位，寫誓言若干紙，如人數，各簽名每紙上，宰一雞，灑血於紙，跪而宣誓，並和雞血於酒而飲之。其誓言則每人各藏一紙”。
1904年冬，劉師培等人謀劃了刺殺王之春事件。王之春任廣西巡撫期間，以事後轉讓廣西全境路礦權為條件，向亨達利洋行借款，並向法國借兵鎮壓哥老會陸亞發、王和順起義。王的所作所為讓革命黨人非常憤慨。王之春被免職後居上海，華興會會員萬福華與劉師培、章士釗、林獬、揚州學生陳自新密謀行刺，劉師培還將張繼所贈手槍借與萬福華，但刺殺時，子彈竟不出膛，萬福華被王的衛兵逮捕。劉師培等人上樓一看，嚇得趕緊將槍仍在地上，倉皇逃走。第二天，章士釗到捕房探望萬福華，捕房尾隨他到住處，搜出了製造炸彈的化學儀器、煉藥爐灶等，張繼、黃興等十餘人均被捕。劉師培亦被拘入捕房坐了一夜，捕房見其形色蒼黃，言語支吾，一看就是怯懦書生，次日便將他釋放。
次年三月，《警鐘日報》因辱罵德國侵略者被查封，劉師培亦被租界巡捕房通緝，劉師培化名“金少甫”，先避往浙江，不久，又應陳獨秀邀請來到安徽蕪湖，先後任教於安徽公學、皖江中學。劉師培與在安徽公學任教的陳獨秀、章士釗等人以教師身份作掩護，秘密組織了反清革命團體嶽王會，培養暗殺人才。
劉師培曾發起編輯鄉土教科書活動，他編寫了《江蘇鄉土歷史教科書》、《江蘇鄉土地理教科書》、《安徽鄉土歷史教科書》、《安徽鄉土地理教科書》等教科書，激發國人愛鄉愛國、保族保種的熱情。
劉師培著有《攘書》，表示“攘除清廷，光復漢族”的決心。
1907年2月，劉師培應章太炎之邀偕同母親、妻子何震及何表弟汪公權東渡日本，加入同盟會。劉師培很快成為章太炎主編的《民報》的主要作者之一。他在《民報》上接連發表《普告漢人》、《利害平等論》、《悲佃篇》、《清儒得失論》、《辨滿人非中國之臣民》等
